Kolòn Kromatografi Endistriyèl

Yonindustrialchromatograficolumnse yon zouti ki itilize pou analiz chimik ki separe konpoze nan yon melanj ak mezire kantite lajan chak konpoze . Konsiste de yon faz estasyonè ak yon faz mobil . Nan analiz kromatografik, se echantiyon an pase nan yon kolòn, kote karakteristik sa yo nan faz la fiks ak faz mobil la pèmèt divès konpoze pase nan kolòn nan nan pousantaj diferan, konsa reyisi separasyon . konpoze sa yo ka Lè sa a, dwe detekte ak quantitativman analize pa detaye {

Efè nan separasyon nan kolòn nan depann sou faz la estasyonè chwazi, kòm byen ke kondisyon yo preparasyon ak opere nan kolòn nan {{0} Kolòn (SCX), kolòn fenil (fenil), kolòn amino (a) mino/NH2), cyano/cn/nitrile, elatriye .

Kolòn endistriyèl kwomatografi gen yon pakèt aplikasyon nan yon kantite jaden, ki gen ladan:

Biopharmaceutique:Kolòn nan kwomatografik se mwayen prensipal la nan separasyon ak pou pirifye nan biopharmaceutique, ki se itilize pou fabrike nan pite segondè, epi segondè aktivite byolojik pwodwi .
Sekirite alimantè:Itilize pou detekte sibstans danjere tankou aditif ak résidus nan manje pou asire sekirite manje .
Siveyans anviwònman:Separasyon ak analiz de polyan nan anviwònman an ak evalyasyon nan bon jan kalite anviwònman .
PETROCHIMICAL:Itilize pou deteksyon pite nan pwodwi petwòl, analiz malpwòpte, elatriye .

Nan anpil domèn tankou analiz endistriyèl, siveyans anviwònman, rechèch dwòg ak devlopman, kolòn kromatografik se yon zouti separasyon kle, ak pèfòmans li yo dirèkteman afekte presizyon an ak disponiblite nan rezilta analyse . pèfòmans nan kolòn nan depann lajman sou kalite a nan konplèks la, yo pral fè sa a, yo ka fè sa, yo te ka fè fas a. Kolòn endistriyèl kromatografik, yo nan lòd yo bay referans itil pou chèchè nan jaden ki gen rapò ak .

Kalite kolòn anbalaj

Seleksyon an nan file kolòn se lajè, ak dapre diferan materyèl debaz yo, li kapab divize an file inòganik, file òganik ak file byolojik . chak filler gen pwòp pwopriyete inik fizik ak chimik li yo ak sijè ki abòde nan aplikasyon .

Filler inòganik

Ranpli inòganik yo konnen pou segondè estabilite mekanik yo, estabilite tanperati ki wo ak estabilite asid-baz, epi yo apwopriye pou plis kondisyon separasyon mande . fillers komen inòganik gen ladan jèl silica, alumina, grafitize kabòn ak zirkonya .}

Silica gel is one of the most commonly used inorganic fillers, and its surface has polar functional groups such as silicon hydroxyl group (SiOH), which is suitable for normal phase chromatography and reverse phase chromatography. In normal phase chromatography, silica gel is used as stationary phase, and the polar components are washed out of the column first. In reverse phase Kromatografi, silica jèl sifas lyezon gen yon polarite relativman fèb nan gwoup fonksyonèl, tankou C18, C8, elatriye ., se polarite a pi gwo nan gwoup la premye wouj soti . fillers silicone gen bon pwodui chimik ak tèmik estabilite ak yo se apwopriye pou yon ranje lajè nan pH ak kondisyon ph.

ALUMINA se tou yon kalite filler inòganik, ak patikil li yo rijid epi yo ka fè nan yon kabann ki estab kolòn kolòn . filler alumina se apwopriye pou faz mobil ak pH jiska 12, men ranje aplikasyon li yo limite akòz aksyon fò li yo ak konpoze alkalin .}

Graphitized kabòn se yon nouvo kalite filler inòganik ki gen sifas ki se baz la nan retansyon san okenn lòt modifikasyon sifas . fillers kabòn grafitize gen yon kapasite retansyon pi fò pase alkil estokaj jèl silica oswa pore polymers ak yo ka apwopriye pou ou pa gen okenn. dwe itilize nan nenpòt ki pH ak tanperati .

Zirconia filler se youn nan nouvo fillers yo inòganik etidye nan dènye ane yo . Li se yon komèsyal pore zirkonya kolòn mikrosfè ak kouch polymère sèlman . filler zirkonya se apwopriye pou pH ranje 1 ~ 14, tanperati jiska 100 degre, gen yon gwo aplikasyon pwospè {{{

 

File òganik

File òganik sitou gen ladan fillers polymère, tankou polystyrène-divinylbenzene, polymethylpropionate ak sou sa . file sa yo ka itilize nan seri a pH nan 1 a 14 epi yo gen pi fò idrofobite {{4} Pwoteyin . Anplis, file òganik gen bon pwodui chimik ak estabilite tèmik epi yo apwopriye pou yon pakèt kondisyon separasyon .

 

File byolojik

File byolojik yo sitou apwopriye pou analiz makromolekul byolojik, tankou pwoteyin oswa asid nikleyik {{0} Biomolecules .

Seleksyon an nan anbalaj kolòn apwopriye se kle a asire efè a separasyon nan kwomatografi . Lè w ap chwazi file, faktè sa yo bezwen yo dwe konsidere:

 Mòd separasyon

Dapre pwopriyete yo nan analytes, se apwopriye mòd nan separasyon kwomatografik chwazi . mòd separasyon kromatografik komen gen ladan yo ranvèse kwomatografi faz (RPC), kwomatografi faz nòmal (Hilic), ion echanj kwomatografi (IEC), Affinity Chromatography (Affinity) ak Modèl Omene. Kondisyon pou file, tankou kwomatografi faz ranvèse anjeneral chwazi fillers ki pa polè ki baze sou jèl silica oswa polymère, pandan y ap kwomatografi faz nòmal chwazi fillers polè .

 Faz fiks ak faz mobil

Chwa a nan faz estasyonè depann sou polarite a, gwosè molekilè ak estrikti nan analyte a . pou sibstans ki sou polè, fillers polè ka chwazi, tankou jèl silica ak file kolòn idrofil; For non-polar substances, non-polar fillers can be selected, such as hydrophobic column fillers. At the same time, the polarity of the mobile phase also needs to match the fixed phase to ensure a good separation effect. For example, in normal phase chromatography, the polarity of the mobile phase should be lower than that of the stationary phase; Nan kwomatografi faz ranvèse, polarite a nan faz mobil lan se pi fò .

 Gwosè patikil ak Ouverture

Gwosè a patikil nan filler la dirèkteman afekte efikasite nan kolòn ak echantiyon kapasite loading . fillers ak grenn fen ka bay pi wo efikasite kolòn, men li ka mennen nan ogmante presyon tounen; Koryas ak grenn anbalaj se benefisye nan loading echantiyon, men efikasite nan kolòn ki ba . Se poutèt sa, seleksyon an nan file bezwen yo dwe balanse dapre bezwen yo separasyon aktyèl . Anplis, gwosè a pò nan filler a tou afekte yo nan gwo grenn yo ak selecity yo nan analyte a nan gwo moz la pou yo ka jwenn anpil nan analyte a nan analyite a nan gwo moz la nan analyite a nan gwo moz la tou pou yo ka mete yo nan analyte a. Ti file gwosè pò yo itil amelyore retansyon nan ti konpoze molekilè .

 Estabilite chimik

Filler la chwazi yo ta dwe chimikman ki estab nan kondisyon analyse epi yo pa reyaji ak echantiyon an oswa faz mobil . Sa a se baz la asire presizyon an ak disponiblite nan efè a separasyon kwomatografik . pou separasyon anba tanperati ki wo, presyon ki wo oswa alkali kondisyon yo, li nesesè yo chwazi yon ranpli ak pi wo.

 Mak ak pri

Diferan mak nan file kolòn ka varye nan pèfòmans, men tou bezwen konsidere faktè pri . Lè w ap chwazi file, li nesesè yo complète konsidere kondisyon yo ak bidjè nan laboratwa a epi chwazi pwodwi pri-efikas .

► pirifye nan antikò monoclonal (mAbs) nan biopharmaceutique

Fon

A global biotech company aimed to scale up the purification of a therapeutic monoclonal antibody (mAb) from a 50 L pilot batch to a 1,000 L commercial batch. The challenge was to maintain >99% pite pandan y ap minimize fòmasyon total ak pwoteyin selil lame (HCP) kontaminasyon .

Metodoloji

Konsepsyon kolòn:

Yon dyamèt entèn 300 mm (ID) × 500 mm kolòn asye pur chaje ak pwoteyin yon résine vokasyon (mabselect asire w, cytiva) .

Maksimòm presyon opere: 3 bar .

Pwosesis paramèt:

Obligatwa tanpon: 20 mm fosfat sodyòm, pH 7.4.

Tanpon elution: 0.1 M asid asid, ph 3.0.

To koule: 150 ml/min (vitès lineyè: 100 cm/h) .

Otomatizasyon:

Entegre yon sèl-itilize detèktè pou pH, konduktivite, ak deteksyon UV (280 nm) .

Otomatik netwayaj-an-plas (CIP) ak 0 . 5 m NaOH.

Rezilta

Sede: 85% (1,020 g nan mAb soti nan 1,200 g brut manje) .

Pite: 99 . 5% (analiz HPLC).

Kontni total:<1% (size-exclusion chromatography, SEC).

HCP rediksyon: soti nan 50, 000 ppm to<5 ppm (ELISA assay).

Takeaways kle

Évolutivité: rapò L/D kolòn nan (longè-a-dyamèt) nan 1 . 67 asire pèfòmans ki konsistan nan tout balans.

Lifecycle résine: pwoteyin A résine a siviv 100 sik ak CIP, diminye pou chak-pakèt depans pa 30%.

Otomatik: Siveyans an tan reyèl redwi entèvansyon manyèl pa 70%, amelyore fyab pwosesis .

Nan aplikasyon pratik, apre yo fin chwazi anbalaj kolòn ki apwopriye a, pwen sa yo bezwen yo dwe peye atansyon a asire efè a separasyon kwomatografik:

 Sètifye li manyèl la enstriksyon kolòn

Anvan ou itilize yon nouvo kolòn, ou ta dwe ak anpil atansyon li enstriksyon li yo konprann nati a nan filler a, kondisyon pou itilize ak antretyen metòd . Sa a ede asire bon pou sèvi ak kolòn nan ak pwolonje lavi sèvis li yo .

 Sèvi ak yon kolòn ki byen plen

Asire ke kolòn nan byen plen, pa gen bul, pa gen okenn fant ak lòt domaj . Sa a ede asire konsistans la ak presizyon nan efè a separasyon kromatografik .

 Minimize fluctuations estrès

Nan pwosesis la nan separasyon kromatografik, fluctuations presyon yo ta dwe minimize pou fè pou evite chòk mekanik ak tèmik . sa a ede pwoteje file kolòn ak pwolonje lavi sèvis yo .

 Sèvi ak kolòn pwoteksyon ak filtè nan-liy

Pou pwoteje fillers kolòn kont kontaminasyon ak domaj, kolòn pwoteksyon ak filtè nan-liy ka itilize .

 Lave kolòn souvan ak sòlvan fò

Regilye flòch nan kolòn nan ak yon sòlvan fò ka retire enpurte ak kontaminan ki rete sou sifas la nan filler la epi kenbe pèfòmans bon separasyon li yo .

 Konplètman filtre echantiyon an ak faz mobil

Anvan enjekte echantiyon an ak faz mobil nan kolòn nan, li ta dwe konplètman filtre yo retire patikil malpwòpte . Sa a ede pou fè pou evite bouche ak efè separasyon redwi .

 Kontwole tanperati kolòn nan

Tanperati a itilize nan kolòn nan gen yon efè enpòtan sou efè separasyon li yo . Nan sikonstans nòmal, tanperati a nan kolòn nan yo ta dwe mwens pase 40 degre . pou kolòn ak matris jèl silica, valè a pH nan faz mobil la ta dwe kenbe ant 3 . 0 ak 8.0 pou evite domaj ak epòk.

Baj popilè: Kolòn Kromatografi Endistriyèl, Konpayi fabrikasyon Kromatografi Endistriyèl Kromatografi, Swèd, faktori